求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

提示：

求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

植物材料


用最精确的方法，称取不超过100mg的植物材料，置于处理过的研钵，加入液氮进行研磨
将研磨得到的粉末，快速转移至无RNase，并经过液氮冷却的2mL离心管(自备)，注意材料要保持冷冻状态
加入450µL Buffer RLT（1mL 加入10μL β-巯基乙醇），颠倒混匀，涡旋
将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column，最大转速离心2分钟，取上清转移至新的2mL的收集管（自备）
加0.5倍体积（约225μL）的无水乙醇，迅速吹打混匀
将样品(约650μL )转移至带有2mL回收管的粉色RNeasy spin column（以下简称column），>=8000g离心15s,将滤出物丢弃
加入700µL Buffer RW1至column，>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物和收集管
转移column至新的收集管（提供），加入500 µL Buffer RPE，>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物
再加入500µL Buffer RPE，>=8000g离心2分钟清洗柱子上的滤膜
(为了保证除净Buffer RPE，可弃旧的收集管和滤出物，取新收集管(自备)
最大转速离心1分钟)
转移RNeasy spin column至1.5mL收集管（提供），加入30-50µl 无RNA酶的水于滤膜上，>=8000g离心1分钟，洗脱RNA
（如果预期得到的RNA大于20µg，可重复第十步）
或者看说明书最好了

求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

提示：

求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

总RNA提取试剂盒步骤：
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

博凌科为新型快速植物DNA大量提取试剂盒（离心柱型）有哪些具体使用说明和注意事项

提示：

博凌科为新型快速植物DNA大量提取试剂盒（离心柱型）有哪些具体使用说明和注意事项

新型快速植物DNA大量提取试剂盒（离心柱型） 产品编号包装 DP3091 6 次 DP309220 次 产品说明: 改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。注意事项:◆ 所有的离心步骤均在室温完成，使用离心力可以达到10，000×g的高速离心机。◆ 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。◆ 需要自备β-巯基乙醇。◆ Buffer P3 和HB buffer中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。◆ 不同来源的植物组织材料中提取的DNA 的量会有差异，一般1g新鲜组织典型产量可达30-250μg。◆ 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保PH大于7.5, PH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，PH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。试剂盒特点:◆ 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。◆ 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。◆ 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。◆ 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30Kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

博凌科为多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒（离心柱型）试剂盒组成及提取原理，特点如何

提示：

博凌科为多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒（离心柱型）试剂盒组成及提取原理，特点如何

博凌科为多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒（离心柱型）
改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶， 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

植物组织RNA提取的难点
1、酚类化合物的干扰
许多植物组织特别是植物的果实和树木类植物中富含酚类化合物。酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应(brownins effect)。被氧化的酚类化合物(如醌类)能与RNA稳定地结合，从而影影响RNA的分离纯化。
2、多糖的干扰
多糖的污染是提取植物RNA时常遇到的另一个棘手的问题．，植物组织中往往富含多糖，而多糖的许多理化性质与RNA很相似，因此很难将它们分开。在去除多糖的同时RNA也被裹携走了，造成RNA产量的减少：而在沉淀RNA
时，也产生多糖的凝胶状沉淀，这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。
3、蛋白杂质的影响
蛋白质是污染RNA样品的又一个重要因素。由干RNase和多酚氧化酶亦属于蛋白质，因而要获得完整的、高质量的RNA就必须有效地去除蛋白杂质。
4、次级代谢产物的影响
从植物组织中提取高质量RNA的另一个难点是许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA的分离。

试剂盒特点:
◆ 快速去除多糖，上样孔无多糖污染：
◆ 独特多酚沉淀剂，防多酚氧化同时沉淀多酚：
◆ 独创漂洗液RD，特异性洗掉基因组，确保得到的RNA无基因组污染：
◆ 成功提取进口TRIzol及Q公司试剂盒无法很好提取的多种植物RNA，包括仙人掌、仙人球、芦荟、凤梨、水仙、黄瓜、辣椒、胡萝卜、玉米、大豆、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜籽等；

提取范围:
仙人掌、仙人球、水仙、黄瓜、胡萝卜、辣椒、西红柿、烟草、玉米、大豆、百合、小麦、拟南芥和其他大多数植物。

产量:
每100mg组织10～50μg不等